he染色的操作步骤(一文总结：HE染色详细操作步骤+细节经验)
人体中的细胞有颜色吗?
我们在显微镜下观察组织和细胞的时，通常要把组织和细胞做成切片或是涂片，这时组织和细胞的厚度一般在1～10微米，在这个厚度的条件下，组织和细胞具有较好的透光性，基本上就没有颜色。
没有颜色非常不利于对组织和细胞的观察，因此，人们发明了多种给组织和细胞上色的方法，称为染色(stain)。其中苏木精-伊红染色(HE染色)是最常用的染色之一。
HE染色全名为苏木精和伊红染色方法，是最基本的病理学染色技术。
一张上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。那么，到底怎样才能能制作出一张高质量的HE染色切片呢？学霸姐姐带你了解一下。
实验材料
固定液：常用95%乙醇和冰丙酮
苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。
伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。
稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%盐酸。
系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。
实验步骤
1，石蜡切片脱蜡至水
依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
2，苏木素染细胞核
切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨水返蓝，流水冲洗。
3，伊红染细胞质
切片入伊红染液中染色1-3min。
4，脱水封片
将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
5，显微镜镜检，图像采集分析
实验结果
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
HE染色实验细节Tips:
1，脱蜡必须干净
脱蜡必须干净，脱蜡不净，会导致切片着色不均，点状或片状不着色，核浆对比不清。
脱蜡不净的原因及验证方法：
1) 二甲苯使用过久，含蜡成分太高或脱蜡效果差：可更换二甲苯验证。
2) 切片经烤片，冷却后放入二甲苯脱蜡或室温太低；延长拖拉时间或用热的切片脱蜡验证。
3) 脱蜡时间太短或振荡太少，幅度太小；可延长脱蜡时间或以多振荡来验证。
4) 洗涤二甲苯用的乙醇使用时间过久，导致乙醇中二甲苯含量过高，二甲苯残留在切片上（由于二甲苯与水不相溶，切片上有二甲苯的地方，苏木精就没有办法渗透进去，在切片染色完成后留下了点状的不着色区域）：更换各道乙醇验证。
5) 二甲苯、乙醇质量不佳（偶有试剂瓶内装的试剂与试剂名不相符）：换批号验证。
6) 更换脱蜡液体时试剂拿错：需重新配置验证。
7) 更换脱蜡液体时试剂次序放错：需重新配置验证。
8) 烤片时间短，切片上水分没有烤干，也会导致着色不匀，出现点状发白区域。
2，苏木精染色时间
苏木精染色时间的快慢由苏木精的PH、成熟度和室温决定。
一方面，当室温低于20℃时，着色能力迅速随温度的降低而下降，因此我们必须延长苏木精的染色时间或给苏木精加热；另一方面，当室温低于20℃，苏木精的成熟能力也在下降，因此，要提前2-3个星期配置苏木精，给苏木精一个充分的氧化时间，避免由于氧化不足而导致不容易上色的现象。
温馨提示：
现在市面上已经有买来后可以直接染色的苏木素溶液，不需要提前2-3个星期配置。小伙伴们不妨一试。
3，反蓝
蓝化最好用流水冲洗，这样可以去除切片上残留的盐酸，以保证切片长期保存不褪色。
最后一点注意事项：使用全自动染色机时，应该在每次染色前先用测试片预染，并随着室温，染液强度的改变不断调整染色时间，在显微镜下观察测试片颜色深浅正常后才开始常规染色并做好室内质控。
掌握了这4点以后，小伙伴们再去试试身手，看看HE染色结果是否有变理想一些呢？
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